SP Cromatograffaeth Pilenni Cyfnewid Cation Cryf

Cyflwyniad i CM Weak Ion-Cyfnewid Cynhyrchion Cromatograffaeth Pilenni

 

1. Trosolwg

Mae cation gwan CM-cyfnewid cromatograffaeth yn dechnoleg buro lle mae grwpiau carboxymethyl yn cael eu bondio ar y bilen i ffurfio modiwl swyddogaethol. Cyflawnir gwahaniad yn seiliedig ar y gwahaniaethau yn y priodweddau gwefr a dwyseddau gwefr o fiomoleciwlau amrywiol. Gan fod y rhan fwyaf o macromoleciwlau biolegol yn cynnwys grwpiau carboxyl neu hydroxyl, gellir addasu eu nodweddion gwefr a'u maint trwy newid gwerth pH yr hydoddiant byffer. Ar ôl i'r biomoleciwlau glymu i'r modiwl bilen sy'n cario gwefrau cyferbyniol, perfformir elution trwy newid cryfder ïonig neu pH y cyfnod symudol. Mae moleciwlau ag affinedd rhwymol gwannach yn cael eu hanwybyddu yn gyntaf, tra bod y rhai sydd â affinedd rhwymol cryfach yn cael eu hanwybyddu yn ddiweddarach, gan gyflawni gwahaniad effeithiol.

 

2. Manteision Cynnyrch

2.1 Cyflym ac effeithlon: Gellir cyflawni capasiti rhwymo uchel ar gyfraddau llif hyd at 40 gwaith yn gyflymach na chromatograffaeth resin confensiynol. O'i gymharu â chromatograffaeth gwely llawn traddodiadol, gall cromatograffaeth bilen leihau amser prosesu 30-40 gwaith. Y gyfradd llif gweithredu nodweddiadol yw 10 MV/munud.

2.2 Effeithlonrwydd rhwymol uchel: Mae cromatograffaeth bilen yn dangos gallu llwytho uchel a chyfraddau llif uchel o dan amodau gollwng pwysedd isel, gan alluogi dal biomoleciwlau wedi'u gwefru mewn un llwybr trwy'r modiwl.

2.3 Graddadwy a hyblyg: Gall yr ystod gyflawn o gynhyrchion cromatograffaeth pilen ddiwallu anghenion prosesu biomacromolecwl amrywiol, gan gwmpasu camau o ddatblygu prosesau i weithgynhyrchu ar raddfa fawr. Mae cynllun y capsiwl yn caniatáu ar gyfer cymwysiadau untro neu gellir eu glanhau a'u hailddefnyddio yn ôl yr angen.

2.4 Cynyddu cynhyrchiant: Mae'r dyluniad cryno yn lleihau ôl troed cyfleuster. Trwy ddileu pacio colofnau, glanhau, dilysu glanhau, a chamau storio colofnau, gellir dechrau prosesu ar ôl cydbwyso gyda chyfaint cymharol fach o glustogi. Heb unrhyw angen am bacio colofnau, glanhau na storio, gellir lleihau costau llafur hyd at fwy na 50%.

 

3 Paramedr Technegol

3.1 Deunyddiau strwythurol

	Graddfa labordy	raddfa fach	Graddfa beilot	Graddfa gynhyrchu
Cyfrol bilen	0.2ml	5ml	140ml	5L
Strwythur cymorth bilen	Polypropylen
Tai bilen	Polypropylen
O ffoniwch	Rwber silicon

3.2 Nodweddion Gweithredu

	Graddfa labordy	- raddfa fach	Graddfa - beilot	Graddfa gynhyrchu
Cyfrol bilen	0.2ml	5ml	400ml	5L
Cyfradd llif a argymhellir	1-6ml/munud	25-150ml/munud	2-12L/munud	25-150L/munud
Uchafswm tymheredd gweithredu	35 gradd
Y pwysau gweithredu uchaf	3 bar (25 gradd)
Gwahaniaeth pwysau uchaf	3 bar (25 gradd)
Amodau storio	20% ethanol hydoddiant dyfrllyd

O'i gymharu â chyfryngau confensiynol, mae bywyd gwasanaeth cromatograffaeth bilen CM yn debyg i fywyd CM agarose gel 6FF.

Ffigur 1. Newidiadau yng nghapasiti llwytho cromatograffaeth bilen CM ar ôl defnydd lluosog mewn profion lysosym.

Yn ogystal, gwnaethom werthuso effeithlonrwydd tynnu proteinau celloedd lletyol ac asidau niwclëig trwy gromatograffaeth pilen. Dangosir y canlyniadau isod.

Tabl 1. Cyfraddau tynnu DNA a phroteinau celloedd gwesteiwr mewn CHO-deunydd IgG a fynegwyd gan ddefnyddio cromatograffaeth pilen CM

Dangosodd cyfres o arbrofion y gall cromatograffaeth bilen CM gael gwared ar halogion yn effeithiol wrth gynnal cyfradd adennill uchel o IgG targed.

	DNA				HCP
	Adferiad IgG	Cynnwys (pg/mg o IgG) gan RT PCR		Ffactor Tynnu	Cynnwys(ng/mg o IgG)gan Elisa		Ffactor Tynnu
Rhedeg	%	Cyn Q Pilen	Ar ôl Q bilen	Log	Cyn Q Pilen	Ar ôl Q bilen	Log
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Gan ddefnyddio cromatograffaeth bilen Gudiling CM o gymharu â brandiau eraill, dangosir y data capasiti llwytho isod.

Capasiti llwytho (mg/mL)	Jinbiao 1	Guidling
Lysosym	18	23
Trypsin	17	20

Tabl 2. Perfformiad llwytho gwahanol broteinau yn ein cynnyrch o'i gymharu â chynhyrchion cystadleuwyr

Mae gwerthusiad cyffredinol yn dangos bod ein gallu llwytho yn debyg i allu cynhyrchion a fewnforir.

Ffigur 2. Prawf cynhwysedd llwytho modiwl cromatograffaeth bilen CM gan ddefnyddio lysosym fel protein safonol.

Cymharwyd y gallu llwytho deinamig hefyd â chynhwysedd y cynhyrchion a fewnforiwyd. Dangosodd y dilysu y gellid osgoi lysosym trwy ddefnyddio 160 mM NaCl, sy'n caniatáu dal y rhan fwyaf o broteinau targed yn effeithlon.

Trwy optimeiddio gwahanol amodau elution, canfuom fod cromatograffaeth bilen yn arddangos ymddygiad elution tebyg i gromatograffaeth gel agarose, lle mae purdeb protein yn amrywio'n sylweddol o dan wahanol grynodiadau halen. Mewn ymchwil a datblygu ymarferol a chynhyrchu, mae angen pennu'n feintiol yr amodau ecwilibriwm elution i gael protein targed purdeb uchel.

 

4. Achosion cais nodweddiadol

• Cael gwared ar DNA, firysau, a phroteinau celloedd lletyol
• Dal plasmidau, firysau, a phroteinau, yn ogystal â phuro oligonucleotidau
• Dadliwio cawl eplesu burum a dal-capasiti uchel o brotein

 

5. Gweithdrefn gweithredu / Llif Gwaith

5.1: Paratoi a chydosod offer:

5.1.1: Gosod y modiwl cromatograffaeth pilen ar system cromatograffaeth AKTA Mae'r dull gosod yn debyg i gyfrwng cromatograffaeth gwely wedi'i bacio; sicrhau bod y cyfeiriad llif yn dilyn y saeth a nodir ar y modiwl. Gellir cysylltu'r modiwl gan ddefnyddio cysylltwyr Luer neu gysylltwyr clamp.

5.1.2 Gosodwch gyfradd llif y fewnfa ar 5–10 MV/munud a defnyddio byffer ecwilibreiddio i lanhau aer o'r modiwl. Parhewch i fflysio nes na welir unrhyw swigod yn yr allfa, yna cysylltwch allfa'r treiddiad i'r system cromatograffaeth.

5.2.:Paratoad cyn-defnyddio

5.2.1: Gosodwch gyfradd llif y fewnfa ar 5–10 MV/munud a pherfformiwch ragdriniaeth gan ddefnyddio 0.5 M NaOH am fwy na 5 MV i sicrhau bod y bilen yn cyrraedd ecwilibriwm.

5.2.2:O dan yr un amodau cyfradd llif, perfformio cyn-driniaeth gyda 1 M NaCl am fwy na 5 MV i sicrhau bod y bilen yn cyrraedd ecwilibriwm.

5.3. Proses cromatograffaeth

5.3.1 Gosodwch gyfradd llif y fewnfa i 5–10 MV/munud a pherfformiwch -driniaeth ymlaen llaw gyda byffer ecwilibreiddio am fwy na 5 MV nes bod y bilen yn cyrraedd ecwilibriwm.

5.3.2 Ar ôl 0.22 μm cyn hidlo, llwythwch y sampl ar y golofn a pharhau nes bod y sampl gyfan wedi'i gosod neu hyd nes y cyrhaeddir y gallu llwytho cromatograffaeth.

5.3.3 Golchwch gyda byffer equilibration am fwy na 10 MV nes bod y gwerth UV yn gostwng i'r llinell sylfaen.

5.3.4 Yn ôl cynllun y broses, cymhwyso elution graddiant neu system elution llinol, a chasglu ffracsiynau mewn segmentau yn ôl yr angen.

5.4 Post CIP-defnyddio triniaeth – CIP (Glan-yn-Lle) ar gyfer system cromatograffaeth pilen.

5.4.1 Gosodwch gyfradd llif y fewnfa i 5–10 MV/munud a'i drin â 1 M NaOH am fwy na 10 MV nes bod y gwerth UV yn disgyn o dan y llinell sylfaen.

5.4.2 Ar ôl 30 munud o olchi cylchredeg, rinsiwch â dŵr nes bod y pH rhwng 7 ac 8, yna newidiwch i ethanol 20% a pharhau i lanhau nes bod y dargludedd bron yn ddigyfnewid.

5.5Membrane cromatograffaeth storio

Ar ôl defnyddio a chwblhau CIP, gellir tynnu'r modiwl bilen a'i storio trwy socian mewn ethanol 20%, neu ei storio ar-lein ar dymheredd ystafell mewn hydoddiant sy'n cynnwys 20% ethanol. Dylid archwilio'r datrysiad ethanol 20% a'i ddisodli'n rheolaidd.

 

6, Gwybodaeth archebu

CM-teipiwch hidlydd capsiwl cromatograffaeth pilen cyfnewid catation gwan

	Graddfa labordy	Graddfa fach	Graddfa beilot	Graddfa gynhyrchu
Model	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Ardal bilen	0.2ml	5ml	400ml	5L

Tagiau poblogaidd: sp cromatograffaeth bilen cyfnewid cation cryf, Tsieina, cyflenwyr, gweithgynhyrchwyr, ffatri, cyfanwerthu, swmp, mewn stoc, sampl am ddim