DEAE Cromatograffaeth Bilen Cyfnewid Anion Gwan

DEAE Cromatograffaeth Bilen Cyfnewid Anion Gwan - Cyflwyniad Cynnyrch

 

1. Trosolwg

Mae cromatograffaeth cyfnewid anion gwan DEAE yn dechneg puro sy'n seiliedig ar wahaniaethau yn y priodweddau gwefr a dwysedd gwefr amrywiol fiomoleciwlau. Gan fod y rhan fwyaf o fiomacromolecwlau yn cynnwys grwpiau swyddogaethol fel grwpiau carboxyl neu hydroxyl, gellir addasu eu nodweddion gwefr a'u maint trwy addasu pH yr hydoddiant byffer. Ar ôl i fiomoleciwlau rwymo i anion neu gyfrwng cyfnewid catïo â gwefr gyferbyniol, cyflawnir gwahaniad trwy newid cryfder ïonig neu pH y cyfnod symudol. Mae moleciwlau ag affinedd rhwymol gwannach yn cael eu hanwybyddu yn gyntaf, ac yna'r rhai sydd â affinedd rhwymol cryfach, gan gyflawni gwahaniad effeithiol.

 

2. Manteision Cynnyrch

2.1 Effeithlonrwydd uchel: Yn cyflawni rhwymiad cryf ar gyfraddau llif hyd at 40 gwaith yn uwch na chromatograffaeth resin. O'i gymharu â chromatograffaeth gwely llawn traddodiadol, mae cromatograffaeth pilen yn byrhau amser proses cyffredinol tua 30-40 gwaith.

2.2 Effeithlonrwydd rhwymol uchel: Mae cromatograffaeth bilen yn arddangos gallu rhwymo uchel a chyfradd llif uchel o dan ostyngiad pwysedd isel, gan ganiatáu i fiomoleciwlau wedi'u gwefru gael eu dal mewn un llwybr trwy'r golofn.

2.3 Graddadwy a hyblyg: Gall y gyfres lawn o gynhyrchion cromatograffaeth pilen ddiwallu anghenion puro biomacromolecwl amrywiol, gan gwmpasu pob cam o ddatblygu prosesau i gynhyrchu ar raddfa fawr. Mae'r dyluniad strwythurol math capsiwl yn cefnogi gweithrediad un defnydd ac ailddefnyddio ar ôl glanhau.

2.4 Gwell cynhyrchiant: Mae'r dyluniad cryno yn lleihau ôl troed cyfleuster. Trwy ddileu pacio colofnau, glanhau, dilysu glanhau, a gweithdrefnau storio colofnau, gellir gweithredu'r system yn uniongyrchol ar ôl equilibration byffer heb bacio neu storio colofn. Gellir lleihau costau llafur hyd at 50%.

 

3. Paramedrau Technegol

3.1 Deunyddiau Strwythurol

	graddfa labordy	raddfa fach	graddfa peilot	graddfa cynhyrchu
Cyfrol bilen	0.2ml	5ml	140ml	5L
Strwythur cymorth bilen	Polypropylen (PP)
Tai bilen	Polypropylen (PP)
O ffoniwch	Silicôn

3.2 Nodweddion gweithredu

	graddfa labordy	raddfa fach	graddfa peilot	Graddfa gynhyrchu
Cyfrol bilen	0.2ml	5ml	400ml	5L
Cyfradd llif a argymhellir	1-6ml/munud	25-150ml/munud	2-12L/munud	25-150L/munud
Uchafswm tymheredd gweithredu	35 gradd
Y pwysau gweithredu uchaf	3 bar (25 gradd)
Uchafswm pwysau gwahaniaethol	3 bar (25 gradd)
Amodau storio	20% hydoddiant dyfrllyd ethanol 20%

Ffigur 1. Newidiadau yng nghynhwysedd llwytho cromatograffaeth pilen ar ôl defnydd lluosog wedi'i fonitro gyda BSA.

Yn ogystal, gwnaethom werthuso effeithlonrwydd tynnu proteinau celloedd lletyol ac asidau niwclëig gan ddefnyddio cromatograffaeth pilen DEAE. Mae'r canlyniadau fel a ganlyn.

	DNA				HCP
	Adferiad IgG	Cynnwys (pg/mg o IgG) gan RT PCR		Ffactor Tynnu	Cynnwys(ng/mg o IgG)gan Elisa		Ffactor Tynnu
Rhedeg	%	Cyn Bilen DEAE	Ar ol DEAE bilen	Log	Cyn Bilen DEAE	Ar ol DEAE bilen	Log
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Tabl 1. Cyfraddau tynnu DNA a phroteinau celloedd lletyol o CHO-IgG a fynegwyd gan ddefnyddio cromatograffaeth pilen DEAE.

Dangosodd cyfres o arbrofion y gall cromatograffaeth bilen Q gael gwared ar amhureddau yn effeithiol, tra'n cynnal cyfradd adennill uchel o'r IgG targed.

Yn ogystal, gwnaethom gymharu cromatograffaeth bilen Gudiling â brandiau a fewnforiwyd, ac mae'r data capasiti llwytho fel a ganlyn.

Ffigur 2. Perfformiad llwytho gwahanol broteinau ar ein cromatograffaeth bilen a chynhyrchion cystadleuwyr

Mae gwerthusiad cyffredinol yn dangos bod ein gallu llwytho yn debyg i allu cynhyrchion a fewnforir.

Ffigur 3. Perfformiad modiwl cromatograffaeth bilen DEAE mewn profion protein colagen

Gan ddefnyddio modiwl cromatograffaeth pilen DEAE, dangosodd canlyniadau dilysu y gallai'r rhan fwyaf o broteinau colagen targed gael eu dal a'u hanwybyddu gan ddefnyddio 135 mM NaCl.

Trwy brofi o dan wahanol amodau elution, canfuom fod cromatograffaeth bilen a chromatograffeg gel agarose yn arddangos ymddygiad elution tebyg, lle mae purdeb protein yn amrywio'n sylweddol o dan wahanol grynodiadau halen. Mewn ymchwil a datblygu ymarferol a chynhyrchu, mae angen pennu'n feintiol yr amodau ecwilibriwm gorau posibl i gael proteinau targed purdeb uchel.

 

4. Achosion cais clasurol

Tynnu DNA, firysau, proteinau celloedd cynnal, ac endotocsinau

Dal plasmidau, firysau, asidau niwclëig, a phroteinau, yn ogystal â phuro oligonucleotidau

 

5. Llif gwaith gweithredu

5.1: Paratoi a chydosod offer

5.1.1 Dylid gosod y modiwl cromatograffaeth bilen ar system cromatograffaeth AKTA mewn modd tebyg i golofnau resin wedi'u pacio, gan sicrhau bod y cyfeiriad llif yn cyd-fynd â'r saethau a chyfeiriad y fewnfa. Cysylltwch gan ddefnyddio cysylltwyr Luer neu ffitiadau clamp.

5.1.2 Gosodwch gyfradd llif y fewnfa i 5–10 MV/munud a defnyddio byffer ecwilibreiddio i lanhau aer. Parhewch i fflysio nes na welir unrhyw swigod yn yr allfa, yna cysylltwch allfa'r treiddiad i'r system cromatograffaeth

5.2:Triniaeth cyn-defnyddio

5.2.1: Gosodwch gyfradd llif y fewnfa i 5–10 MV/munud a pherfformiwch driniaeth ymlaen llaw gyda 0.5 M NaOH am fwy na 5 MV i sicrhau bod y bilen yn cyrraedd ecwilibriwm.

5.2.2: O dan yr un gyfradd llif, cyn-trin ymhellach gyda byffer ecwilibreiddio (1 × PBS) am fwy na 5 MV i sicrhau bod y bilen yn cyrraedd ecwilibriwm.

5.3 Proses cromatograffaeth

5.3.1

Gosodwch gyfradd llif y fewnfa i 5–10 MV/munud a chyn-trin gyda byffer ecwilibreiddio am fwy na 5 MV nes bod y bilen yn cyrraedd ecwilibriwm.

5.3.2

Ar ôl i'r sampl gael ei -hidlo ymlaen llaw trwy hidlydd 0.22 μm, llwythwch y sampl nes bod y llwytho wedi'i gwblhau neu nes cyrraedd y gallu llwytho cromatograffaeth.

5.3.3

Golchwch gyda byffer ecwilibration am fwy na 10 MV nes bod yr amsugnedd UV yn gostwng i'r lefel waelodlin.

5.3.4

Defnyddiwch elution graddiant neu elution llinol yn unol â chynllun y broses, a chasglwch samplau mewn ffracsiynau yn ôl yr angen.

5.4,CIP Post-triniaeth defnyddio – CIP o ddyfais cromatograffaeth pilen

5.4.1

Gosodwch gyfradd llif y fewnfa i 5–10 MV/munud a pherfformiwch driniaeth glanhau-yn-lle (CIP) gyda 0.5 M NaOH am fwy na 10 MV nes bod yr amsugnedd UV yn disgyn o dan y llinell sylfaen.

5.4.2

Ar ôl cylchredeg golchi am 30 munud, newidiwch i olchi dŵr nes bod y pH rhwng 7-8, yna parhewch i lanhau gydag ethanol 20% nes bod y dargludedd yn aros bron yn gyson.

5.5, storio cromatograffaeth bilen:

Ar ôl defnyddio a chwblhau CIP, gellir tynnu'r modiwl bilen a'i storio trwy socian mewn ethanol 20%, neu ei storio ar-lein ar dymheredd ystafell mewn datrysiad ethanol 20%. Dylid archwilio'r datrysiad ethanol 20% a'i ddisodli o bryd i'w gilydd.

 

6.Ordering gwybodaeth

DEAE-teipiwch hidlydd capsiwl cromatograffaeth pilen cyfnewid anion gwan

	Graddfa-labordy	raddfa fach	Graddfa beilot	Graddfa gynhyrchu
Model cynnyrch	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Cyfrol bilen	0.2ml	5ml	400ml	5L

Tagiau poblogaidd: cromatograffaeth bilen cyfnewid anion dae gwan, Tsieina, cyflenwyr, gweithgynhyrchwyr, ffatri, cyfanwerthu, swmp, mewn stoc, sampl am ddim