Rhagofalon ar gyfer defnyddio tiwb ultrafiltration
(1) Dewiswch y tiwb ultrafiltration priodol. Yn gyffredinol, ni ddylai'r pwysau moleciwlaidd sydd i'w gadw fod yn fwy na 1/3 o bwysau moleciwlaidd y protein targed. Er enghraifft, os yw pwysau moleciwlaidd y protein targed yn 35kDa, gellir dewis y tiwb ultrafiltration â phwysau moleciwlaidd 10kDa. Os yw pwysau moleciwlaidd y protein targed tua 10kd, gellir defnyddio tiwb ultrafiltration â phwysau moleciwlaidd o 3KD. Darllenwch y llawlyfr cyfarwyddiadau yn ofalus a rhowch sylw i oddefgarwch gwahanol bilen ultrafiltration i wahanol gemegau.
(2) Mae'r ultrafiltration sydd newydd ei brynu yn sych. Ychwanegwch ddŵr ultrapure cyn ei ddefnyddio, a bydd y dŵr yn mynd trwy'r bilen yn llwyr. Oerwch ef ymlaen llaw mewn baddon iâ neu oergell am ychydig funudau. Yna arllwyswch y dŵr ac ychwanegwch yr hydoddiant protein. Ni fydd y swm a ychwanegir yn fwy na'r llinell wen ar ben y tiwb. Dylai'r llawdriniaeth fod yn ysgafn. Cyn ychwanegu hydoddiant protein, mae angen gosod y tiwb ultrafiltration ar iâ ar gyfer precooling.
(3) Cydbwysedd. Dylid cydbwyso màs a chanol disgyrchiant. Sylwch na ddylai'r cyflymder a'r cyflymiad fod yn rhy gyflym, fel arall bydd y bilen ultrafiltration yn cael ei niweidio'n uniongyrchol. Dechrau allgyrchol ultrafiltration (precooling centrifuge i 4 gradd). Ar ôl i RPM gwahanol allgyrchyddion gael ei drawsnewid yn G, mae'n wahanol. Addaswch gyflymiad y centrifuge i'r gêr isaf i leihau'r pwysau ar y bilen. Sylwch fod yn rhaid i chi aros nes bod y centrifuge yn cyrraedd y cyflymder targed cyn gadael y centrifuge, fel arall pan fo problem gyda'r centrifuge, ni allwch ddelio ag ef am y tro cyntaf. Rhaid addasu cyfeiriad y bilen a'r siafft cylchdroi yn unol â'r cyfarwyddiadau (yn achos centrifuge cylchdroi ongl, mae'r bilen yn berpendicwlar i'r siafft). Mewn defnydd ymarferol, mae'r cyflymder yn gyffredinol yn is na'r un yn y llawlyfr, a all ymestyn bywyd gwasanaeth y bibell allgyrchol.
(4) Pan gaiff ei grynhoi i'r 1ml sy'n weddill, cymerwch doddiant byffer 50ul ac ychwanegwch 10ul i lifo drwodd i weld a yw'n troi'n las, er mwyn barnu a yw'r tiwb ultrafiltration yn gollwng protein. Os bydd y tiwb yn gollwng, arllwyswch yr haen uchaf a llifo drwy'r tiwb newydd a dechrau ultrafiltration. Er mwyn barnu'n gywir a yw'r tiwb yn gollwng, centrifuge gyda 5mgml BSA am 10 munud, yna cymerwch lif trwyddo, rhedeg glud protein neu Bradford ar gyfer mesur bras, a pharhau i ychwanegu'r hydoddiant protein sy'n weddill ar gyfer canolbwyntio (gweithredu ar rew i atal y protein rhag cael ei gwresogi) nes bod yr holl atebion crynodedig yn cael eu hychwanegu. Rhowch sylw i p'un a yw dyddodiad protein yn digwydd yn ystod centrifugio, gan arwain at rwystr pibell. Os bydd dyddodiad yn digwydd, pennwch achos penodol dyddodiad, p'un a yw'r crynodiad protein yn rhy uchel neu'r byffer yn amhriodol; Gellir datrys y cyntaf trwy ultrafiltration ar yr un pryd â thiwbiau ultrafiltration lluosog i leihau'r crynodiad. Yr olaf yw newid toddiannau byffer gwahanol nes nad yw'r protein yn gwaddodi.
(5) Defnyddir y camau blaenorol i grynhoi protein. Os ydych chi am newid y byffer, pan fydd cyfanswm yr hydoddiant protein wedi'i grynhoi i tua 1ml, ychwanegwch glustog newydd yn ysgafn (ultrafiltration trwy 0.22um pilen ultrafiltration), ac yna canolbwyntio i tua 1ml am dair gwaith yn olynol. Mae cyfaint terfynol y crynodiad olaf yn dibynnu ar y crynodiad protein gofynnol, nad yw'n gyffredinol yn fwy na 500ul, neu gellir ei ganolbwyntio i lai na 200ul. Yn ôl y crynodiad cyfaint o leiaf 10 gwaith bob tro, gall gyrraedd mwy na 1000 o weithiau dair gwaith, a all yn y bôn gyflawni pwrpas newid y byffer.
