Cynnal a chadw a defnyddio dull tiwb ultrafiltration

Cynnal a chadw a defnyddio dull tiwb ultrafiltration

Swyddogaeth y tiwb ultrafiltration:

1) Crynodiad; 2) dihalwyno; 3) Amnewid byffer; 4) Mae ganddo effaith puro rhannol.

1. Gellir defnyddio'r tiwb ultrafiltration newydd yn uniongyrchol heb driniaeth arall;

2. Ni ellir sterileiddio'r tiwb ultrafiltration ar dymheredd uchel;

3. Trin tiwb ultrafiltration wrth newid protein crynodedig

Gellir ailddefnyddio'r tiwb ultrafiltration. Mwydwch ef yn 0.1M NaOH am 1-2h, golchwch ef â dŵr, ac yna golchwch ef â hydoddiant perthnasol (dŵr wedi'i sterileiddio neu PBS) ar y centrifuge am 3 gwaith, y gellir ei ddefnyddio i grynhoi protein newydd;

4. Trin tiwb ultrafiltration a osodir fel arfer

Ar gyfer y tiwb ultrafiltration a ddefnyddir yn aml, mwydwch ef yn 0.1M NaOH am 1-2 awr, golchwch ef â dŵr a'i socian mewn dŵr wedi'i sterileiddio. Gwnewch yn siŵr eich bod yn cadw'r bilen hidlo yn wlyb ac yn atal bacteria rhag tyfu;

5. Trin tiwb ultrafiltration gosod am amser hir

Os na ddefnyddir y tiwb ultrafiltration am amser hir, mwydwch ef yn 0.1M NaOH am 1-2h, golchwch ef â dŵr, a'i socian mewn ethanol 20 y cant i'w storio. Gwnewch yn siŵr eich bod yn cadw'r bilen hidlo yn wlyb ac yn atal bacteria rhag tyfu;

6. cyflymder allgyrchol a ddefnyddir ar gyfer tiwb ultrafiltration

Y cyflymder allgyrchol yn gyffredinol yw 4000rpm (argymhellir 3000g yn gyffredinol, ac ni all yr uchafswm fod yn fwy na 4000g). Ar ôl centrifugation am 5-8 munud, gellir crynhoi sampl 4ml i lai nag 1ml i ddwsinau o ficroliters; Os yw'r cyflymder yn rhy uchel, bydd y protein targed yn disgyn i ffwrdd, gan arwain at golli protein targed; Cyflymder isel, llafurus ac effeithlonrwydd gwaith isel;

7. Rhagofalon pan fydd y pen gwn yn ymestyn i mewn i'r tiwb ultrafiltration

Wrth ychwanegu hydoddiant protein neu byffer i'r tiwb ultrafiltration, gellir defnyddio'r pen gwn glas; Fodd bynnag, pan fydd y protein targed crynodedig yn cael ei amsugno o waelod y tiwb ultrafiltration, rhaid defnyddio'r pen gwn melyn; Pan fydd y pen gwn yn cael ei fewnosod yn y tiwb ultrafiltration, rhaid ei atal rhag cyffwrdd â'r bilen hidlo er mwyn osgoi tyllu'r bilen hidlo;

8. lleihau arsugniad protein colli tiwb ultrafiltration

Gall pilen y tiwb ultrafiltration amsugno protein, a fydd yn lleihau'r protein targed tua 30 y cant; Er mwyn lleihau colli protein, ar ôl amsugno'r hydoddiant protein targed, carthu gwaelod y tiwb ultrafiltration gyda byffer protein i olchi'r rhan fwyaf o'r protein sydd wedi'i arsugnu gan y bilen hidlo a lleihau colli protein targed; Os yw'r protein wedi'i buro wedi'i grynhoi, rhowch sylw na ddylai'r cyfaint crynodedig fod yn rhy fach; Yn gyffredinol, ni waeth pa mor centrifuged, bydd tua 200 µ L ateb protein yn cael ei gadw ar y gwaelod;

9. Sut i ddiffinio methiant tiwb ultrafiltration

O dan y defnydd arferol, pan nad yw'r bilen hidlo wedi'i thyllu, nid yw'r hydoddiant protein crynodedig yn cynnwys protein neu mae'r swm yn isel iawn (gan gynnwys y protein targed), tra bod yr ateb hidlo cyntaf yn cynnwys protein targed, mae'n nodi bod y bilen hidlo yn annilys a angen tiwb ultrafiltration newydd yn ei le.