Cwestiynau Cyffredin am Ddyfeisiadau Hidlo Allgyrchol
Q1. Mae angen gwahanu proteinau o wahanol bwysau moleciwlaidd, felly faint o wahaniaeth ddylai pwysau moleciwlaidd y proteinau ei angen?
A: Mae angen i faint y ddau brotein fod yn wahanol 10 gwaith neu fwy.
Q2. Gall centrifugaldyfeisiau hidlo gael eu sterileiddio a gwrthsefyll golchi alcali?
A: Gellir ei sterileiddio gyda hydoddiant dyfrllyd ethanol 75 y cant, a gall y bilen wrthsefyll 0.1-0.5N sodiwm hydrocsid golchi alcali.
Q3. Sut i ddelio ag a yw'r protein yn gwaddodi yn ystod crynodiad?
A: Os yw'r protein wedi'i grynhoi'n rhy gyflym neu'n rhy gryno, gall achosi dyddodiad protein, ac ni ddylai crynodiad terfynol y protein ar ôl crynodiad fod yn rhy uchel; Proteinau sy'n sensitif i gyfradd grynodiad ac sy'n dueddol o waddodi, dull gwelliannau a awgrymir:
Lleihau'r cyflymder allgyrchol
Defnyddiwch bilen ultrafiltration gyda thoriad pwysau moleciwlaidd uwch
Chwythu a sugno y tiwb crynodedig ac yna centrifuge
Q4. Beth yw'r rheswm posibl pam ydyfeisiau hidlo allgyrcholni ellir ei centrifuged i lawr?
A: Gallwch ddefnyddio tua 20 y cant o hydoddiant dyfrllyd ethanol ar gyfer centrifugio cychwynnol os na all y tiwb ultrafiltration gael ei centrifuged, oherwydd bod y bilen ultrafiltration yn hollol sych, wyneb y bilen yn wan hydroffobig, a gellir adfer y fflwcs ar ôl ymdreiddiad ag isel. hydoddydd tensiwn wyneb.
Q5. Dulliau defnydd cywir a storio dyfeisiau hidlo allgyrchol
A: Dylai'r dyfeisiau hidlo allgyrchol gael eu centrifugio â dŵr wedi'i buro cyn ei ddefnyddio i wirio ei gyfanrwydd. Ar ôl pob defnydd, mae angen ei storio mewn cyflwr gwlyb i atal y bilen rhag sychu.
Q6. Sut mae'r dyfeisiau hidlo allgyrchol yn cael gwared ar endotocsin?
A: Nid yw'r dyfeisiau hidlo allgyrchol a ddarparwyd gennym wedi'u trin ag endotocsinau, ac oherwydd bod endotocsinau yn bodoli'n eang mewn natur, gellir glanhau samplau sydd angen endotocsinau ymlaen llaw gyda 0.5N sodiwm hydrocsid cyn yr arbrawf, ac yna eu golchi â RO dŵr i gael gwared ar y rhan fwyaf o'r endotoxin.
Q7. Pan ddefnyddir y protein crynodedig ar gyfer dadansoddiad i lawr yr afon, canfyddir bod ymyrraeth, beth yw'r rheswm?
A: Gellir golchi'r dyfeisiau hidlo allgyrchol ymlaen llaw gyda hydoddiant byffer neu ddŵr wedi'i buro. Os yw'r ymyrraeth yn dal i fodoli, golchwch â 0.1N sodiwm hydrocsid, ac yna golchi â dŵr pur.
Q8. Icanfyddir t nad oes protein targed yn y dwysfwyd ar ôl crynodiad. Beth yw'r rhesymau posibl?
A: 1) Ni ddylai crynodiad cychwynnol y protein fod yn rhy isel, os yw'r crynodiad yn rhy isel, efallai na fydd y bilen yn gallu cadw.
2) Dewiswch y maint mandwll bilen priodol. Mae crynodiad allgyrchol y tiwb hidlo yn perthyn i hidlo diwedd marw, ac mae maint mandwll y bilen yn gyffredinol yn llai na 2 waith neu fwy na'r protein targed.
3) Dewiswch y cyflymder allgyrchol cywir
4) A yw'r protein targed yn gwaddodi
Q9. Triniaeth passivation o ddyfeisiau hidlo allgyrchol
A: Gall pretreatment passivation o wyneb y dyfeisiau hidlo allgyrchol leihau'r golled arsugniad o brotein ar wyneb y bilen, yn y rhan fwyaf o achosion, gall pretreatment y golofn cyn canolbwyntio'r hydoddiant protein gwanedig wella'r adferiad, oherwydd gall yr ateb lenwi'r agored safleoedd arsugniad protein gwag ar y bilen a'r wyneb, y dull passivation yw cyn-socian y golofn gyda nifer uchel o ateb passivation am fwy nag 1 awr, fflysio y golofn yn drylwyr gyda dŵr distyll, ac yna centrifugate y golofn unwaith gyda dŵr distyll. i gael gwared yn llwyr ar yr ateb passivation a all aros ar y bilen, byddwch yn ofalus i beidio â gadael i'r bilen sychu ar ôl passivation, os ydych chi am ei gadw i'w ddefnyddio yn y dyfodol, mae angen ichi ychwanegu dŵr distyll di-haint i gadw'r bilen yn wlyb., Cysylltwch â ein peirianwyr ar gyfer atebion passivation cyffredin.
Q10. Ydy'r bilen ultrafiltration yn hidlo'r moleciwlau yn hierarchaidd?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 y cant os ydych chi'n defnyddio pilen ultrafiltration 100kd, fodd bynnag, nid yw moleciwlau sy'n llai na maint mandwll y bilen yn mynd trwy'r bilen yn llwyr yn rhydd. Mae'r gyfradd cadw moleciwlaidd o 67kd yn fwy na 70 y cant, ac mae'r protein o 43kd hefyd yn fwy na 40 y cant wedi'i dorri i ffwrdd, nid yw'r gwahanol gydrannau mewn toddiant cymysg yn mynd trwy'r bilen mor syml a hawdd ag ateb cydran sengl, Yn ymarferol , os ydych chi eisiau ynysu dau macromoleciwl, dylai'r gwahaniaeth pwysau moleciwlaidd rhyngddynt fod wyth gwaith neu fwy.
Q11. Sut i wahanu moleciwlau mawr a bach yn effeithiol trwy ultrafiltration?
A: Oherwydd anghenion y broses, mae'r amhureddau yn y macromoleciwlau yn cael eu tynnu, neu mae'r moleciwlau bach yn cael eu tynnu o'r macromoleciwlau, mae'n normal wrth gynhyrchu. Mae'n angenrheidiol iawn i ddewis maint mandwll bilen priodol, dull hidlo ac amodau gweithredu. Yn gyffredinol, os dewisir manyleb MWCO y bilen rhwng y ddau brotein, gellir cyflawni gwahaniad cymharol ddelfrydol. Os yw'r hydoddiant protein yn gymharol wan, bydd gweithredu o dan bwysau isel hefyd yn helpu i sicrhau canlyniadau gwell. Dewiswch hidliad llif tangential a pherfformiwch ymlediad lluosog i gael effaith gwahanu gwell.
