Astudiaeth Ar Broses Egluro O Eplesu Dwysedd Uchel Lysate Escherichia Coli Ailgyfunol
Er mwyn lleihau ymyrraeth hylif materol i'r cromatograffaeth a gwella adferiad y protein targed, astudiwyd y broses egluro lysate eplesu dwysedd uchel o ddau fath o ailgyfunol Escherichia coli. Dewiswyd straeniau BL21-HP1036 a BL21-palA sy'n mynegi genynnau allweddol Streptococcus suis a Haemophilus parasuis. Defnyddiwyd proses llif diriaethol, proses allgyrchu cyflym a phroses egluro casét pilen i werthuso'r cynnyrch protein yn ôl cymylogrwydd a chanfod electrofforesis.
Dangosodd y canlyniadau fod BL{0}}HP1036, BL21-palA lysate eplesu dwysedd uchel yn mynegi genynnau allweddol o Streptococcus suis a Haemophilus parasuis wedi'u hegluro gan hidlo casét pilen a allgyrchiad, a bod y cynnyrch protein dros 80%, a allai leihau'r ymyrraeth cromatograffig yn effeithiol a gwella'r gyfradd adennill.
Rhagymadrodd
Ar hyn o bryd, Streptococcus suis (SS) a Haemophilus parasuis (HPS) yw'r pathogenau clefyd bacteriol mwyaf cyffredin mewn ffermydd moch, sy'n dod â cholledion mawr i'r diwydiant moch. Gellir rhannu SS yn gyfanswm o 35 seroteipiau 1-34 a 1/2, a gellir rhannu HPS yn 1-15 seroteipiau, ac mae'r ddau yn aml yn gymysg, yn bennaf yn achosi polyserositis moch, arthritis, llid yr ymennydd, endocarditis , septisemia bacteriol a broncitis.
Oherwydd y nifer fawr o seroteipiau o Streptococcus suis a Haemophilus parasuis, mae'r croes-amddiffyniad rhwng gwahanol seroteipiau yn wan, a bydd ymwrthedd gwrthfiotig yn cynyddu'n sylweddol pan gaiff ei drin â gwrthfiotigau, a fydd yn effeithio ar yr effaith therapiwtig.
Mae brechlynnau wedi dod yn un o'r dulliau effeithiol o atal SS a HPS. Mae brechlynnau anweithredol, brechlynnau gwanedig, brechlynnau byw, brechlynnau is-uned a brechlynnau wedi'u peiriannu'n enetig, ond mae brechlynnau anweithredol a brechlynnau gwanedig ar y farchnad yn bennaf, ac mae eu hamddiffyniad imiwn yn dda, ond nid yw'r croes-amddiffyniad yn amlwg. Mae brechlyn subunit yn fath newydd o frechlyn yn erbyn streptococws suis, sy'n fath newydd o frechlyn gyda thraws-amddiffyniad cryf a phris isel. Mae ymchwil a datblygu brechlynnau is-uned o Streptococcus suis a Haemophilus parasuis yn ateb perffaith i broblemau atal a rheoli Streptococcus suis a Haemophilus parasuis sy'n pla ar y diwydiant moch yn Tsieina.
Mae brechlynnau is-uned Streptococcus suis a Haemophilus parasuis yn destun eplesiad dwysedd uchel gan Escherichia coli ailgyfunol. Mae egluro'r lysate yn cael effaith fawr ar gynnyrch proteinau targed, ond prin yw'r adroddiadau perthnasol. Mae sut i wireddu cam egluro'r broses eplesu a phuro yn waith pwysig. Yn y papur hwn, ailgyfunol E. coli BL21-HP1036, BL21-palA eplesu dwysedd uchel fel y gwrthrych, i astudio sut i leihau cymylogrwydd yr hydoddiant egluro yn effeithlon, gwella'r cynnyrch protein, ar gyfer Proses eplesu brechlyn is-uned Streptococcus suis i gyflawni technoleg malu ac egluro diwydiannol i ddarparu sylfaen ddamcaniaethol a chymorth technegol.
1. Deunyddiau a dulliau
1.1 Deunyddiau
1.1.1 Straen
Mae Streptococcus suis a Haemophilus parasuis yn straenio BL21-HP1036, BL21-pa-lA
1.1.2 Prif gyfrwng ac adweithyddion
Dyfyniad burum a llamhidydd; Sodiwm clorid; Kanamycin, IPTG; Fformaldehyd o; Pecyn gel SDS-TUDALEN.
1.1.3 Prif offer prawf
eplesydd dwysedd uchel; Centrifuge cyflymder uchel; Offer electrofforesis; System delweddu gel uwchfioled; Malwr uwchsonig; Centrifuge cyflymder uchel bach; Sbectrophotometer uwchfioled; Tabl ysgwyd tymheredd cyson; Offer cromatograffaeth affinedd.
1.2 Dulliau
1.2.1 Diwylliant eplesu dwysedd uchel
Cafodd y straenau colifform ailgyfunol cymwys BL21-HP1036 a BL{21-pa-lA eu brechu ar gyfrwng synthetig ar 2%(V/V) a'u meithrin ar 37 gradd am 35-40 h.
1.2.2 Mynegiant ailgyfunol a achosir gan brotein
Pan ddechreuodd yr ateb eplesu OD{{0}±0.1, yr anwythiad, y tymheredd sefydlu oedd 35 gradd ±0.5 gradd, a daeth y diwylliant i ben ar ôl 10h o ymsefydlu.
1.2.3 Gwasgedd uchel mathru homogenaidd a centrifugation
Cafodd yr hylif bacteria a basiodd y prawf anactifadu ei falu gan homogenizer pwysedd uchel ar gyfer cracio celloedd yn y drefn honno, gyda phwysedd o 100 ~ 150 MPa. Ar ôl ei falu, cadwyd yr hylif wedi'i falu ar dymheredd isel.
Cafwyd y supernatant gan centrifuge gyda chyflymder uchel, cyflymder allgyrchol: 15000 rpm, rheoli tymheredd: 10 gradd ~ 15 gradd, cyflymder pigiad: 0.5 ~ 1 L/min, yn y drefn honno, casglwyd y supernatant, a'r Roedd supernatant wedi'i lenwi â chynwysyddion sy'n tynnu endotoxin.
1.2.4 Eglurhad ar gasét bilen microhidlo
Golchwyd y bilen â 10L o ddŵr wedi'i buro i un cyfeiriad, a chynhaliwyd hidlo llif tangiadol. Cymerwyd 300 ml o'r ataliad bacteriol wedi'i dorri ar ôl centrifugio o'r centrifuge piblinell a'i egluro â chasét bilen microfiltration 0.45um. Mesurwyd cymylogrwydd trwy samplu yn y drefn honno, a chymharwyd cymylogrwydd ar ôl centrifugation, cymylogrwydd yr hylif clir yn y casét bilen microfiltration a chymylogrwydd yr hylif crynodedig yn y casét bilen microfiltration. Canfuwyd cynnwys protein y sampl gan gromatograffeg ac electrofforesis i werthuso'r cynnyrch protein.
Cam 2: Canlyniadau
2.1 Data egluro a chanlyniadau profion protein BL21-HP1036 a BL{{21-palA
Y canlyniadau yn FIG. 1 yn dangos bod cymylogrwydd hylif gwasgu Escherichia coli ailgyfunol BL21-HP1036 a BL{21-palA wedi gostwng o 4 500 NTU a 4 000 NTU i 1970 NTU a 520 NTU, yn y drefn honno, ar ôl centrifugation tiwb. Gostyngwyd cymylogrwydd BL21-HP1036 a BL21-palA ailgyfunol Escherichia coli i 25 NTU a 1.28 NTU drwy ddull casét pilen microhidlo. Gellir gweld bod y defnydd o hidlo llif tangential casét bilen microfiltration a sianel llif agored wedi'i optimeiddio yn cael effaith dda ar leihau endotoxin, gludedd a chymylogrwydd hylif cromatograffig na'r hidliad centrifuge traddodiadol, a gall leihau'r heteroprotein ailgyfunol E. coli yn sylweddol ac asid niwclëig.
2.2 Adennill protein o samplau BL21-HP1036 a BL{21-palA
Mae Tabl 1 yn dangos bod protein ailgyfunol Escherichia coli BL21-HP1036 yn bodoli yn yr hydoddiant eglurhaol microhidlo a’r uwchnatydd crynodedig a gwmpesir gan y bilen microhidlo, a chyfanswm y cynnyrch protein ar ôl adennill y protein o’r hydoddiant egluredig microhidlo a’r uwchnatydd crynodedig Mae tua 88.5%. Roedd protein BL21-palA hefyd yn bodoli yn yr hydoddiant eglurhaol microhidlo ac uwchnatur yr hydoddiant crynodedig a orchuddiwyd gan gasét pilen microhidlo. Cyfanswm y cynnyrch o BL21-PALa protein oedd 81.5%.
3. Casgliad
Yn y papur hwn, mae'r straen sy'n mynegi'r genynnau allweddol BL{{{{{{}}}}HP1036 a BL21-palA o Streptococcus suis a Haemophilus parasuis yn y drefn honno wedi mynd trwy eplesu dwysedd uchel ac wedi pasio 0.45 Cymylogrwydd yr hylif materol oedd lleihau'n sylweddol gan y broses casét bilen microfiltration um, sy'n dangos bod y dechnoleg hidlo llif tangential gyda chasét bilen microfiltration yn well na hynny gyda centrifuge cyflym, a gallai leihau'n sylweddol y protein amhuredd ac asid niwclëig yr ailgyfunol Escherichia coli sydd wedi'i dorri.
Ar ôl casglu'r hylif clir yn y casét bilen microhidlo sengl, roedd 62.9% Gan fod 37.1% o'r protein targed o BL21-HP1{7}}36 yn ddwysfwyd microhidlo neu'n bodoli yn y casét bilen microhidlo a cholledion eraill , mabwysiadwyd dull dau gam i'w egluro. Yn y cam cyntaf, defnyddiwyd casét bilen microfiltration 0.45um i egluro a chasglu'r exudate; yn yr ail gam, casglwyd yr hylif crynodedig sy'n weddill ar ôl centrifugio tiwb, a chyfunwyd yr hylif clir dau gam fel y sampl cromatograffig Ni chynyddodd gwerth cymylogrwydd hylif eplesu BL21-palA yn sylweddol, gallai'r cynnyrch protein gyrraedd mwy na 85.5%, a gallai cynnyrch protein BL21-hylif eplesu Pala gyrraedd 81.5% ar ôl triniaeth dau gam.
O ran sut i ddewis y casét bilen microhidlo, gall Guidling Technology ddarparu atebion o ansawdd uchel i chi. Mae ein casét bilen microfiltration a chynhyrchion cyfres casét bilen ultrafiltration yn defnyddio polyether sulfone fel y cludwr, wedi'i gynllunio'n arbennig ar gyfer biotechnoleg. Mae gan ein bilen polyether sulfone fanteision trwybwn uchel, arsugniad protein isel, cryfder mecanyddol uchel, ymwrthedd effaith ac yn y blaen. Rydym yn darparu clampiau pilen arbennig i chi i fesur pwysau'r fewnfa a'r allfa mewn amser real, a gallwn ddarparu ymweliadau technegol yn unol â'ch anghenion i addasu eich system uwch-hidlo / micro-hidlo arbennig. Gellir defnyddio system llif tangential o'r fath ar gyfer cynhyrchu bach, peilot a graddfa fach, a gall fod yn ymhelaethiad llinellol yn llawn i fodloni'ch gofynion prawf a'ch gofynion cynhyrchu yn llawn.
Am Guidling
Mae Guidling Technology yn fenter uwch-dechnoleg genedlaethol sy'n canolbwyntio ar fiofferyllol, diwylliant celloedd, puro a chrynodiad biofeddygaeth, diagnosis a hylifau diwydiannol. Rydym wedi llwyddo i ddatblygu dyfeisiau hidlo allgyrchol, casetiau ultrafiltration a microfiltration, hidlydd firws, system TFF, hidlydd dyfnder, ffibr gwag, ac ati Sy'n cwrdd yn llawn â senarios cais biofferyllol, diwylliant celloedd, ac ati. Defnyddir ein hidlwyr pilenni a philenni yn eang mewn crynodiad, echdynnu a gwahanu cyn-hidlo, micro-hidlo, ultrafiltration a nanofiltradiad. Mae ein llinellau cynnyrch niferus, o hidlo labordy bach, untro i systemau hidlo cynhyrchu, profi sterility, eplesu, diwylliant celloedd a mwy, yn diwallu anghenion profi a chynhyrchu. Mae Guidling Technology yn edrych ymlaen at gydweithio â chi!
