Brechlyn gronynnau tebyg i firws a'i broses buro i lawr yr afon
Mae brechlyn gronynnau tebyg i firws (VLP) yn dechnoleg brechlyn sy'n seiliedig ar strwythur y firws ond nad yw'n cynnwys y deunyddiau genetig firaol. Maent yn ysgogi ymateb imiwn cryf trwy ddynwared morffoleg ac antigenau wyneb firysau naturiol, ac yn darparu mwy o ddiogelwch oherwydd eu hanallu i efelychu. Mae brechlynnau VLP yn ddewis arall gwell yn lle brechlynnau traddodiadol (gwanhau a anactif byw yn fyw). Ni all brechlyn VLP efelychu yn y corff, felly mae'n addas i bawb, gan gynnwys menywod beichiog neu'r rheini sydd â systemau imiwnedd dan fygythiad. Yn ogystal, gellir defnyddio proteinau capsid (gan gynnwys proteinau strwythurol eraill) o firysau â genomau wedi'u segmentu, fel firysau ffliw, firysau salwch ceffylau Affricanaidd, a firysau bluetongue, hefyd i ddatblygu brechlynnau VLP heb boeni am faterion ailgyfuno genetig fel brechlyn byw yn fyw. Yn ail, mae VLP yn gallu dynwared strwythur firysau go iawn, yn wahanol i frechlynnau anactif, y gellir addasu eu proteinau strwythurol yn ystod anactifadu, gan arwain at nam imiwnogenig.
Ffig. 1. Mecanwaith ffurfio VLPau a VLP simnai
Nodweddion Brechlyn VLP
1. Strwythur tebyg i firysau naturiol: Mae VLPau yn cael eu hunan-ymgynnull gan firaol un neu fwy o broteinau strwythurol (fel proteinau capsid), ac mae eu maint a'u siâp yn debyg i firysau go iawn.
2. Di-heintus: Nid yw'n cynnwys y genom firaol, ni all efelychu nac achosi afiechyd.
3. Imiwnogenigrwydd Uchel: Gellir cydnabod strwythur gronynnog gan y system imiwnedd yn effeithlon ac actifadu ymatebion celloedd B a T. T. Yn gallu cymell gwrthgyrff niwtraleiddio ac imiwnedd cellog (ee brechlynnau HIV, HPV).
4. Diogelwch Uchel: Yn addas ar gyfer pobl â swyddogaeth imiwnedd isel (fel brechlyn Hepatitis B VLP).
Ffig. 2. Brechlynnau VLP sydd ar gael
System Gynhyrchu Brechlyn VLP
Gellir cynhyrchu VLP trwy amrywiaeth o systemau mynegiant, mae llwyfannau cyffredin yn cynnwys:
1. System Bacwlofirws Cell Pryfed:
Manteision: Cynnyrch uchel, cost isel, sy'n addas ar gyfer cynulliad protein cymhleth.
Cais: Brechlyn HPV, Brechlyn Ebola.
2. Celloedd mamalaidd (ee celloedd HEK293):
Manteision: Mae addasiadau ôl-gyfieithiadol yn agosach at fodau dynol ac yn addas ar gyfer VLPau wedi'u gorchuddio (fel brechlynnau ffliw).
3. Systemau Burum (ee Pichia Pastoris):
Manteision: Defnyddiwyd cyflym, cost isel, mewn brechlyn hepatitis B.
4. Systemau Planhigion (ee cloroplastau tybaco):
Yn gyfeillgar i'r amgylchedd ac yn raddadwy, yn cael ei ddatblygu (ee brechlyn VLP norofeirws).
Proses buro i lawr yr afon o frechlyn VLP
Mae amrywiaeth systemau mynegiant VLPS yn arwain at annibynadwyedd prosesau puro i lawr yr afon.
Ffig. 3 Siart Llif Proses i lawr yr afon gyffredinol
Cynhaeaf ac Eglurhad:
Ym mhob math o gyfrwng diwylliant, gan bropio yn ôl diwylliant celloedd, mae nifer fawr o ronynnau firws, yn ogystal â llawer o falurion meinwe celloedd, cynhyrchion metabolaidd ac amhureddau eraill, gan wneud y diwylliant yn ganolig cymylog neu'n lled-gwmni, os yw'n canolbwyntio'r cyfrwng diwylliant yn uniongyrchol, ni fydd y pilen ultrafiltration yn cael ei chwblhau a bod y crynodeb yn cael ei ffrwydro ac yn cael ei blocio a bod y crynodeb yn cael ei blocio ac yn cael ei blocio a bod y crynodeb yn cael ei ffrwydro ac yn cael ei blocio ac yn cael ei blocio. Felly, rhaid ei egluro yn gyntaf cyn crynodiad, i gael gwared ar y gronynnau mawr yn y cyfrwng diwylliant, fel ei fod yn dod yn doddiant tryleu neu'n dryloyw, a gall crynodiad y cyfrwng diwylliant wneud y broses grynodiad yn normal a sicrhau oes gwasanaeth y bilen ultrafiltration. Mae eglurhad cyn crynodiad datrysiad diwylliant yn gyswllt technegol allweddol yn y broses o ganolbwyntio.
Mae proses egluro effeithlon yn gofyn am gyfuniad o gapasiti uchel i gael gwared ar ronynnau solet, cynnyrch cynnyrch uchel, graddfa hawdd, ac amddiffyniad i unedau gweithredu i lawr yr afon.
Ddulliau
Centrifugation: Mae centrifugation gwahaniaethol yn cael gwared ar ronynnau mawr.
Hidlo Dwfn: Defnyddiwch hidlydd aml -haen (ee 1.2μm → 0. 45μm) i egluro'r uwchnatur.
Hidlo llif tangential (TFF): Yn addas ar gyfer cynhyrchu màs, yn canolbwyntio samplau ac yn cael gwared ar ronynnau bach o amhureddau.
Fodd bynnag, os yw'r raddfa tyfu yn rhy fawr, mae centrifugation yn cymryd amser hir, bydd angen nifer fawr o bilenni hidlo dwfn, felly mae cost nwyddau traul yn cynyddu'n fawr. Ar yr un pryd, bydd dwysedd uchel diwylliant celloedd yn lleihau llwyth y bilen hidlo ddwfn, gan arwain at gostau uwch a gwanhau gormod o gynnyrch.
Mae dau fath o gydran pilen TFF: casét fflat a ffibr gwag. Mae hidlo llif tangential (TFF) yn cael ei yrru gan y gwahaniaeth pwysau traws -bilen. Mae sylweddau ac amhureddau sy'n llai na mandwll y bilen yn mynd trwy'r bilen, tra bod amhureddau fel celloedd â gronynnau mwy yn cael eu trapio. Maint mandwll y bilen a ddefnyddir ar gyfer microfiltration yw {{{0}}. 45/0.22μm. Gall ffibr gwag brosesu hylif cynnwys solet uchel yn uniongyrchol, megis cyfrwng diwylliant celloedd dwysedd uchel, gall ddileu camau centrifugio a chyn-hidlo, gellir defnyddio llai o gamau, gweithrediad syml, pilen dro ar ôl tro trwy lanhau, lleihau buddsoddiad offer a chostau gweithredu, yn unol â gofynion cynhyrchu modiwlaidd awtomataidd.
Crynodiad Ultrafiltration (TFF):
Targed: Er mwyn lleihau faint o driniaeth gromatograffig, gwella'r effeithlonrwydd cromatograffig ac amddiffyn y golofn cromatograffig.
Yn gyffredinol, gall ultrafiltration (TFF) ganolbwyntio mwy na 100 gwaith o VLP, a gall cyfradd symud heteroprotein gyrraedd 99%. Yn eu plith, mae gan dechnoleg hidlo pilen ffibr gwag fanteision grym cneifio ysgafn ac isel, nid yw'n hawdd ei blygio, gweithrediad hyblyg, oes hir, cost isel ac ymhelaethiad hawdd, felly argymhellir dewis ffibr gwag ar gyfer VLP dwys a phuredig.
Pan ddefnyddir dull ultrafiltration ar gyfer canolbwyntio a phuro, mae'n bwysig iawn dewis maint mandwll y bilen dde, sy'n pennu effeithlonrwydd ac ansawdd y crynodiad yn uniongyrchol. Ar y naill law, mae angen dewis agorfa'r bilen i ddal y moleciwlau targed yn effeithiol i sicrhau'r cynnyrch, ac ar y llaw arall, dylid ystyried effaith symud a chyflymder prosesu heteroproteinau yn llawn. Felly, yr egwyddor orau yw dewis y bilen gyda'r maint mandwll mwyaf a all ddal y moleciwl targed, a cheisio dewis y bilen hidlo gyda dosbarthiad maint mandwll unffurf.
Puro cynradd:
1. Dull dyodiad
Dyodiad glycol polyethylen (PEG): Mae angen crynodiad PEG optimized a chrynodiad halen ar wlybaniaeth ddetholus i gydbwyso cynnyrch a phurdeb.
2. Cromatograffeg
Cromatograffeg affinedd:
Affinedd heparin: Defnyddio priodweddau VLPS o wefr negyddol arwyneb (ee, HPV VLP).
Cromatograffeg cyplu gwrthgyrff: penodoldeb uchel ond drud.
Cromatograffeg cyfnewid ïon (IEX): Dewiswch Gyfnewidfa Anion (EG, Colofn Q) neu Gyfnewidfa Cation (EG, colofn SP) yn dibynnu ar nodweddion gwefr arwyneb VLP, a gwneud y gorau o raddiant pH a halen er mwyn osgoi agregu gronynnau.
Cromatograffeg Rhyngweithio Hydroffobig (HIC): Yn seiliedig ar hydroffobigedd wyneb VLPS, sy'n addas ar gyfer rhai VLPau nad ydynt wedi'u hamgáu.
Puro cain:
Cromatograffeg Gwahardd Moleciwlaidd (SEC, hidlo gel):
Tynnu proteinau gwesteiwr gweddilliol, asidau niwclëig neu agregau, ynghyd ag amnewid byffer. Cydraniad uchel ond fflwcs isel, a ddefnyddir yn aml fel y cam mireinio terfynol.
Cromatograffeg aml-fodd:
Er enghraifft, gall resinau cyfresi craidd capto, ynghyd â chyfnewid ïon ac effaith rhidyll moleciwlaidd, gael gwared ar amrywiaeth o amhureddau mewn un cam.
Anactifadu firws/tynnu asid niwclëig (os oes angen):
Triniaethau Nuclease: megis benzonase yn diraddio DNA/RNA gwesteiwr.
UF/DF: Cydlynu system TFF i gael gwared ar ddarnau bach o asidau niwcleig ac ensymau.
Crynodiad a pharatoi:
Hidlo llif tangential (TFF):
Canolbwyntiwch i dargedu titers wrth ddisodli byfferau (fel PBS neu byfferau llunio).
Hidlo di -haint:
0. Mae hidlo pilen 22μm yn sicrhau sterility.
Achos nodweddiadol
Mae'r canlynol yn brosesau puro i lawr yr afon ar gyfer brechlynnau VLP nodweddiadol.
Am Guidling
Mae technoleg Guidling yn fenter sy'n canolbwyntio ar gynhyrchu ac uwch-dechnoleg sy'n canolbwyntio ar eglurhad, gwahanu a phuro biofferyllol i lawr yr afon. Defnyddir y cynhyrchion yn helaeth yn y broses hidlo o mAb, brechlyn, diagnosis, cynhyrchion gwaed, serwm, endotoxin a chynhyrchion biolegol eraill; Mae gan dechnoleg Guidling "Casettes hidlo a dyfais hidlo llif tangential", "pilen ffibr gwag", "hidlydd firws", "pilen ddwfn", "hidlydd sterilization", "dyfeisiau hidlo allgyrchol" a chynhyrchion eraill, ac mae ganddo nifer fawr o linellau cynnyrch, o brofi taflodydd bach, o fater o faterion cynhyrchu, i beri i fater o faterion cynhyrchu. Mae Guidling Technology yn edrych ymlaen at gydweithredu â chi!